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Détection d'ADN recombinant

Il existe différentes méthodes pour vérifier que le bon segment d'ADN (ADN de passager) a été inséré dans le vecteur et que le clone recombinant souhaité a été obtenu. Une distinction est faite entre les processus directs et indirects.

Dans la méthode directe, les clones reçoivent un phénotype bien sélectionnable qui, dans certaines conditions de croissance, les distingue des faux clones qui ne contiennent pas ou un mauvais ADN.

Dans les méthodes indirectes, soit le produit du gène, par exemple une protéine particulière, soit la séquence d'ADN souhaitée est détecté dans les clones recombinants.

Méthodes directes

  • Sélection par complémentation : Cette méthode peut être utilisée si l'organisme hôte (par ex. E. coli Il existe des mutants métaboliques qui, faute d'enzyme, ne peuvent plus synthétiser eux-mêmes certaines substances. Ainsi, les mutants ne peuvent croître que si ce défaut est complémenté (c'est-à-dire complété) par l'absorption de l'ADN recombinant. En pratique, l'ADN recombinant porte le gène de la protéine manquante comme marqueur.
  • Inactivation du marqueur : En introduisant un ADN étranger dans un gène marqueur tel qu'un gène de résistance aux antibiotiques, ce gène marqueur est inactivé (la résistance aux antibiotiques est perdue) et un nouveau phénotype est formé.

Méthodes indirectes

  • Schéma de restriction : caractérisation des sites de coupure pour les enzymes de restriction. La position des interfaces peut être prédite à partir de la séquence d'acides aminés connue pour laquelle le segment de gène en question doit coder. Si un certain ADN est inséré dans cette zone, le schéma de restriction change en conséquence.
  • Méthode d'hybridation : Dans toutes les méthodes d'hybridation (hybridation de colonies ou de plages, etc.), l'ADN ou l'ARN à analyser est détecté via la fixation spécifique à la séquence de segments d'acides nucléiques marqués complémentaires (les sondes). Le marquage peut être radioactif ou par fixation d'un marqueur luminescent ou de couleur.
  • Détection de protéines spécifiques : Afin de pouvoir détecter un certain segment d'ADN à partir d'un mélange de fragments d'ADN recombinants, la protéine est détectée qui est codée par ce segment d'ADN. Les procédures habituelles sont celles in vitro-Traduction, tests immunologiques, clonage d'exons ou détection de protéines en mini cellules.


Vidéo: Virukset vs. Ihmiset osa 2 (Juillet 2022).


Commentaires:

  1. Chlodwig

    Oui bien

  2. Bonifacio

    Accordé, avis très drôle

  3. Matchitehew

    Je voudrais savoir, merci beaucoup pour votre aide dans cette affaire.



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